各位小伙伴都聽說過死體積吧。死體積越大，導(dǎo)致樣品擴(kuò)散的空間很大，色譜峰會(huì)更容易展寬，峰形變差。那么死體積該如何定義呢，死體積大小如何計(jì)算，這里小編就給各位小伙伴做個(gè)介紹。

死體積的定義

死體積狹義上指的是色譜柱中未被固定相占據(jù)的空隙體積，即色譜柱內(nèi)流動(dòng)相的體積。廣義上的死體積是指進(jìn)樣位置（進(jìn)樣口）到檢測(cè)位置（檢測(cè)器流通池）這一段的體積（PS:除去色譜柱中填料體積），一旦色譜柱連接，這段體積（圖示橙色管路）是不變的（死的）。

HPLC中色譜柱死體積該如何計(jì)算

對(duì)于HPLC來說，該如何計(jì)算死體積呢。

死體積(dead volume,V0)——由進(jìn)樣器進(jìn)樣口到檢測(cè)器流動(dòng)池未被固定相所占據(jù)的空間。它包括4部分：進(jìn)樣器至色譜柱管路體積、柱內(nèi)固定相顆粒間隙（被流動(dòng)相占據(jù)，Vm）、柱出口管路體積、檢測(cè)器流動(dòng)池體積。其中只有Vm參與色譜平衡過程，其它3部分只起峰擴(kuò)展作用。為防止峰擴(kuò)展，這3部分體積應(yīng)盡量減小。

死時(shí)間(dead time,t0)——不保留組分的保留時(shí)間。即流動(dòng)相（溶劑）通過色譜柱的時(shí)間。
測(cè)量系統(tǒng)死體積通常需要通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)行測(cè)量，常用方法是通過進(jìn)一針和色譜柱固定相沒有任何作用的特殊溶液（方法中會(huì)有規(guī)定，例如：尿嘧啶，少量NaNO3或甲醇溶于流動(dòng)相得到的溶液，也有直接用100％色譜純甲醇進(jìn)樣的情形）時(shí)，就會(huì)得到一個(gè)色譜峰，由此峰可以測(cè)得死時(shí)間（t0），這就是t0的實(shí)測(cè)結(jié)果。

然后通過計(jì)算得到系統(tǒng)死體積:
死體積（V0) = 死時(shí)間t0×流動(dòng)相的流速F。

減小死體積的注意事項(xiàng)

在我們使用或維護(hù)的過程中，如果涉及管路等配件的更換，應(yīng)該選擇與原規(guī)格一致的配件，以確保死體積與原來一致，避免死體積的增加而帶來峰形的展寬。

接裝色譜柱時(shí)，需確保管線接頭匹配完好（特別注意peek管接頭的使用，以及管線與色譜柱的連接處）避免形成接頭空腔（如下圖）。

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