適用于辣椒醬中羅丹明B的檢測。

2、檢測原理

采用非極性有機溶劑（正己烷+丙酮）將羅丹明B從辣椒醬中溶解并提取，提取液過中性氧化鋁SPE小柱吸附羅丹明B，然后用非極性有機溶劑（正己烷+丙酮）洗脫樣品油脂和內源性干擾物，再用極性有機溶劑（甲醇-水）將羅丹明B從小柱上洗脫，供儀器分析

3、提取步驟

取辣椒醬1g，置入15ml離心管中，加入10ml 20%丙酮-正己烷溶液，超聲提取 10 min，離心后取上清液。重復提取兩次，合并三次提取的上清液，待SPE凈化。

4、SPE柱凈化過程

SPE柱：月旭Welchrom®羅丹明B專用固相萃取柱，3g/6mL

1）活化：10ml 20% 丙酮-正己烷溶液；

2）上樣：將提取好的樣品溶液加入小柱中，流速不宜過快；

3）淋洗：30ml 20%丙酮-正己烷淋洗至過柱流出液體為無色，棄去流出液，抽干小柱，

4）洗脫：10ml 80%甲醇-水溶液，收集洗脫液，用80%甲醇-水溶液定容至10mL，上機測定。

注意：

1）進行加標回收率實驗時，往1g辣椒醬中加入40mg/mL 的標液0.125mL；

2）配置25ml 40mg/ml羅丹明B標準溶液，用20%丙酮正己烷無法溶解，需加入2ml甲醇助溶解。

3）將上清液加入月旭Welchrom®羅丹明B專用固相萃取柱中，含羅丹明B的樣品提取液在柱上部會出現(xiàn)鮮亮的粉紅色的熒光條帶，且粉紅條帶隨含量的增加而加深和加寬，不含羅丹明B的樣品提取液不會出現(xiàn)粉紅色條帶，只會出現(xiàn)黃紅色的不清晰的寬帶；

4）用含20%丙酮-正己烷淋洗小柱，粉紅色的條帶不下移，但更清晰，其余的黃紅色帶下移可大部分被洗脫出，可判斷為含羅丹明B的可疑樣品；

5）待洗柱的流出液無色時，使用10ml 80%甲醇-水溶液洗脫，將羅丹明B色帶洗下并收集。

6）羅丹明B標準溶液進液相時用80%甲醇-水溶液稀釋上機；

7）過柱速率不能太快，否則回收率不理想；

5、色譜條件

色譜柱：月旭Ultimate XB-C18, 4.6×150 mm, 5µm；

流動相：75%甲醇-水溶液；

流速： 1.0mL/min

柱溫： 30℃

檢測波長：550nm

進樣量： 20µL

6、色譜圖或者加標回收率結果